Důkaz DNA
Deoxyribonukleová kyselina je izolována z vhodného biologického materiálu ( mlíčí) po rozmělnění v hypertonickém roztoku NaCl. Zbytky materiálu se odstraní odstředěním a DNA přítomná v supernatantu se vysráží v podobě jemných vláken po jeho nalití do destilované vody.
Chemikálie a pomůcky:
kapří mlíčí, 1M roztok NaCl, 5% roztok NaOH (C), písek, laboratorní odstředivka, odstřeďovací kyvety, třecí miska s tloučkem, kádinka, špejle, zkumavky
Postup práce: 1 g kapřího mlíčí 5 minut homogenizujeme ve třecí misce s malým množstvím písku. Po částech přidáme 25 ml roztoku NaCl a směs roztíráním dále homogenizujeme. Výslednou směs roztíráme a promícháváme ve třecí misce ještě 15 minut. Viskozita směsi vzrůstá. Suspenzi převedeme do odstřeďovacích kyvet a odstředíme 10 minut při 3000 ot/min. Kyvety před odstřeďováním musíme vyvážit na stejnou hmotnost. Supernatant poté opatrně a pomalu slijeme do cca 100 ml destilované vody v 250 ml kádince. Vyloučená vlákna DNA opatrně vyjmeme namotáním na špejli. Preparát DNA rozpustíme nebo suspendujeme v 1 ml 5 % roztoku NaOH, roztok rozdělíme do zkumavky k důkazu DNA.
Chemikálie a pomůcky:
difenylaminové činidlo (T), kádinka, zkumavka, trojnožka, síťka s keramickou vložkou, kahan, sirky.
K roztoku RNA a DNa ve skleněné zkumavce přidáme 1 ml difenylaminového činidla a zkumavka se zahřívá ve vroucí vodní lázni 10 minut. Po této době zhodnotíme změnu zbarvení.
Chemikálie a pomůcky:
difenylaminové činidlo (T), kádinka, zkumavka, trojnožka, síťka s keramickou vložkou, kahan, sirky.
K roztoku RNA a DNa ve skleněné zkumavce přidáme 1 ml difenylaminového činidla a zkumavka se zahřívá ve vroucí vodní lázni 10 minut. Po této době zhodnotíme změnu zbarvení.
Nejšetrnější uchování roztoku DNA je jeho zmrazení, tento roztok je stabilní po dobu několika měsíců. Naproti tomu izolovaná vysušená DNA rychle denaturuje.