Chromatografie na sloupci
Zelené části rostlin obsahují nejrůznější typy barviv. Barviva se dají rozdělit na koloně obsahující různé sorpční materiály, které se liší různou schopností zadržovat jednotlivé složky extraktu barviv. Pigmenty se z rostlinného materiálu vyextrahují nejprve do acetonu. Dále se převedou se do petroletheru (rozpuštěním acetonu ve vodě) a petroletherový extrakt se následně rozdělí na koloně.
Chemikálie a pomůcky:
Aceton p.a. (10 ml) /F/, petrolether p.a. (25 ml) /F, Xn/, mořský písek p.a., destilovaná voda, pro přípravu kolony: oxid hlinitý, uhličitan vápenatý, sacharosa, rostlinný materiál (3-5 g), třecí miska, lžička, nálevka, Erlenmeyerova baňka se zábrusem a zátka, kolona, vata, špejle, odsávací baňka, vývěva, kapátko.
Postup práce: Rostlinný materiál roztrháme na kousky a rozetřeme v třecí misce s mořským pískem. Přidáme aceton, promícháme a vše převedeme do zábrusové Erlenmeyerovy baňky. Přidáme petrolether, baňku uzavřeme a obsah protřepáváme 10 minut. Dolijeme destilovanou vodou a necháme stát bez přístupu světla (v laboratorním stole), dokud nedojde k oddělení petroletherové vrstvy od zbývající směsi.
Příprava kolony:
Před přípravou kolony musíme nechat všechny součásti vyschnout a sorbenty musí být také suché. Kolonu ucpeme vatou a prostrčíme otvorem v zátce v hrdle odsávací baňky. Tu napojíme na vodní vývěvu, kterou mírně zapneme. Do kolony postupně sypeme oxid hlinitý (1 díl), uhličitan vápenatý (2 díly) a sacharosu (3 díly). Po nasypání promyjeme petroletherem a před vyschnutím kolony nadávkujeme 1 ml petroletherového extraktu. Opět promýváme petroletherem a sledujeme vývoj barevných zón.
Barvy jednotlivých složek:
chlorofyl a - modrozelený
chlorofyl b - žlutozelený
xantofyly - světle žluté
karoteny – oranžové
Příprava kolony:
Před přípravou kolony musíme nechat všechny součásti vyschnout a sorbenty musí být také suché. Kolonu ucpeme vatou a prostrčíme otvorem v zátce v hrdle odsávací baňky. Tu napojíme na vodní vývěvu, kterou mírně zapneme. Do kolony postupně sypeme oxid hlinitý (1 díl), uhličitan vápenatý (2 díly) a sacharosu (3 díly). Po nasypání promyjeme petroletherem a před vyschnutím kolony nadávkujeme 1 ml petroletherového extraktu. Opět promýváme petroletherem a sledujeme vývoj barevných zón.
Barvy jednotlivých složek:
chlorofyl a - modrozelený
chlorofyl b - žlutozelený
xantofyly - světle žluté
karoteny – oranžové
Chlorofyl v průběhu fotosyntézy absorbuje energii světelného záření a používá ji k syntéze sacharidů z oxidu uhličitého a vody.
Chlorofyl je umístěn na thylakoidních membránách, které jsou v chloroplastech.
